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利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能

点击次数:324  发布时间:2021-07-27

利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能

关键词

血管紧张素I,液相色谱质谱,固相萃取,Angiotensin IAng IReninLC-MS/MSSPE

前言

血管紧张素IAng I)是较为常见的临检标志物之一,通过对血管紧张素I提取效果的测试,能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。

本文通过对比市售的某有名的进口品牌HLB 96SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang I试验的各项方法学指标,直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。

实验设计

如下表所示,使用1% BSA制备四个浓度水平的Ang I系列标准溶液,辅以稳定同位素标记的Ang I内标。

Ang I

浓度(ng

内标浓度(ng

LOQ

0.5

10

低水平(L

7.5

10

中水平(M

30

10

高水平(H

80

10

设定如下条件的SPE,应用于某著名进口品牌HLB 96SPE多孔板。使用适配的正压96SPE操作装置运行样品。

名称

操作

活化

使用500 μL甲醇活化SPE板两次

平衡

使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板两次

上样

500 μL LOQ、低(L)、中(M)、高(H)上样

淋洗1

使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板两次

淋洗2

使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板两次

洗脱

每孔各加入250 μL甲醇,收集洗脱液于96孔板中

 

                                                                                 2.png

与此对应的,为AUTO M32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品,每个样品使用2mg HLB磁性萃取剂。

指令

溶液

孔位

溶剂量(μL

活化

甲醇

1

500

平衡

5%甲酸水溶液

2

500

上样

样品溶液

3

500

淋洗1

5%甲酸水溶液

4

500

淋洗2

20%甲醇水溶液

5

500

洗脱

甲醇

6

250

排废

/

2

600

 

3.png

 

数据和比较

将实验设计中所述的四个标准样本,每个样品重复三次提取,比较两种前处理方法提取后,在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差,结果如下图所示。其中,左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。

 

4.png

 

 

5.png

 

 

b,低水平(L)重现性

 

6.png

 

 

7.png

 

 

 

可以看到,两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别,但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96SPE多孔板。

在提取率的比较中,我们选择某著名进口品牌HLB 96SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准(100%),以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示,左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96SPE多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。

8.png


最后如下图展示的LOQ水平两种方法提取后,在LC-MS/MS所得的MRM色谱图。图a为使用传统的96位SPE多孔板所得色谱图,图b为磁性萃取剂所得色谱图。可以看到,在所有浓度水平下,磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96SPE多孔板,且均超过后者50%以上,最高甚至达到了约1.8倍。

 

9.png

结果讨论
明显地,在LOQ水平下,磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96SPE多孔板提取,这与提取率结果是完全一致的。

通过上述数据比较,我们可以得到如下表所述的结果。

 

绝对重复性

相对重复性

提取率

LOQ质量

操作模式

某著名进口品牌96SPE多孔板

较佳

较佳

适中

适中

手动+负压装置

磁性萃取剂

较佳

较佳

50%以上

较佳

少量手动+自动设备

均优于某著名进口品牌的HLB 96SPE多孔板。同时,AUTO M32全自动提取仪固有的“一次移液”和“无人值守”操作模式,降低了样品前处理中的人为参与,同时大幅提高了自动化水平。

 

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